基底膠的應(yīng)用及使用方法

　　基底膠是從富含胞外基質(zhì)蛋白的EHS小鼠腫瘤中提取出基底膜基質(zhì)，其主要成分有層粘連蛋白、Ⅳ型膠原、巢蛋白、肝素糖蛋白，還包含生長因子和基質(zhì)金屬蛋白酶等。在室溫條件下，基底膠聚合形成具有生物學(xué)活性的三維基質(zhì)，模擬體內(nèi)細(xì)胞基底膜的結(jié)構(gòu)、組成、物理特性和功能，有利于體外細(xì)胞的培養(yǎng)和分化，可用于對細(xì)胞形態(tài)、生化功能、遷移、侵染和基因表達(dá)等的研究。

　　基底膠的使用方法：

　　1、培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)可無需稀釋直接包被，包被厚度可為0.5 mm(薄層)或1.0 mm(厚層)。Matrigel也可以在無血清培養(yǎng)基中稀釋后用于包被培養(yǎng)器皿表面，根據(jù)細(xì)胞類型和應(yīng)用目的確定相應(yīng)Matrigel濃度。

　　2、Matrigel在10℃以上即可成膠，在操作過程中，保持Matrigel一直置于冰上，所有接觸Matrigel的細(xì)胞培養(yǎng)器皿，移液吸頭，分裝管等都必須預(yù)冷后使用。

　　3、Matrigel基質(zhì)會(huì)有色差變化(淡黃色到深紅色)，是由于酚紅和碳酸氫鹽與CO2 作用引起的，與5%CO2 平衡后色差即會(huì)減少。凍融后，輕輕搖晃試劑瓶使Matrigel 分散均勻。所有操作均需在無菌環(huán)境下進(jìn)行，試劑瓶瓶蓋可用70%乙醇擦拭，并自然干燥。應(yīng)使用預(yù)冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。

　　4、解時(shí)可將Matrigel 基質(zhì)置于4℃冰箱內(nèi)冰上過夜溶解。成膠后的Matrigel可以在4℃ 24-48h后重新呈液態(tài)。

　　基底膠的應(yīng)用：

　　基底膠可形成的三維培養(yǎng)基質(zhì)，可促進(jìn)上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、Sertoli細(xì)胞、黑色素瘤細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、甲狀腺細(xì)胞及毛囊細(xì)胞等的貼壁與分化。同時(shí)，基底膠還能影響乳腺上皮細(xì)胞的蛋白表達(dá)，支持外周神經(jīng)的新生和牛輸卵管上皮細(xì)胞的分化。不同配方的基底膠可以滿足不同的實(shí)驗(yàn)要求。

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