ELISA中常見的假陰性的因素

在ELISA實(shí)驗(yàn)中，假陰性的常見原因主要包括內(nèi)源性因素、外源性因素、操作因素和試劑盒自身因素。為了減少假陰性的發(fā)生，需要從多個(gè)方面進(jìn)行預(yù)防和解決。

內(nèi)源性因素

基因突變：個(gè)別個(gè)體的基因突變可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果為假陰性，尤其是當(dāng)檢測(cè)用抗體的結(jié)合位點(diǎn)在突變區(qū)時(shí)。

待檢物含量偏低：樣本內(nèi)被測(cè)物的濃度較低，易造成假陰性結(jié)果，如某些疾病發(fā)展初期被檢物濃度低于檢測(cè)限。

外源性因素

樣品反復(fù)凍融：血清樣品的反復(fù)凍融會(huì)使血清中的抗體效價(jià)下降，造成假陰性出現(xiàn)。

樣品處理不當(dāng)：標(biāo)本用肝素或EDTA等抗凝劑處理，高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷，能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

樣品存放不當(dāng)：標(biāo)本放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，抗原或抗體免疫活性減弱，亦可出現(xiàn)假陰性。

操作因素

加樣不準(zhǔn)確：樣品稀釋液多加或血清少加，會(huì)降低血清中待檢IgG的吸附性，導(dǎo)致假陰性結(jié)果。

洗滌不當(dāng)：洗滌條件一致性較差或洗滌機(jī)使用不當(dāng)，血清中殘留的纖維蛋白絲或洗滌液析出的結(jié)晶易造成“花板”，導(dǎo)致假陽(yáng)性或假陰性。

孵育問題：溫箱調(diào)溫器異常使溫箱溫度降低或孵育時(shí)反復(fù)打開溫箱門，造成孵育時(shí)反應(yīng)不充分，出現(xiàn)假陽(yáng)性結(jié)果。

試劑盒自身因素

試劑盒敏感性：某些廠家為了提高檢測(cè)的特異性，會(huì)降低試劑盒的敏感性，從而造成在檢測(cè)過(guò)程中假陰性的出現(xiàn)。

為了減少ELISA實(shí)驗(yàn)中的假陰性，需要從標(biāo)本采集、處理、保存到實(shí)驗(yàn)操作和試劑盒選擇等多個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行嚴(yán)格控制和管理。這包括優(yōu)化標(biāo)本處理流程、提高操作一致性、選擇高質(zhì)量的試劑盒等措施。通過(guò)這些措施，可以有效降低ELISA實(shí)驗(yàn)中假陰性的發(fā)生率，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。x

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