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細胞搖瓶培養(yǎng)細胞時注意事項
我們在使用細胞搖瓶來培養(yǎng)細胞時總會遇到各種各樣的問題,BUNSEN本生今天跟大家分享一下我們在使用細胞搖瓶培養(yǎng)細胞時的注意事項。
三角細胞搖瓶:
1、2.8L和5L細胞搖瓶瓶蓋的透氣膜面積大于同類產(chǎn)品,適用于細胞的高密度培養(yǎng),工作體積可裝至總體積的60-80%,相同體積的搖瓶細胞產(chǎn)量更高。
2、2.8 L瓶子瓶頸圓弧設(shè)計過度自然,瓶頸大小在保證有效氣體交換空間的同時,還方便單手握持操作。
3、5L瓶子配備符合人體工程學(xué)設(shè)計的把手,方便搖瓶的拿取和液體的轉(zhuǎn)移。
4、瓶子標(biāo)準(zhǔn)產(chǎn)品配備0.2μm的除菌透氣。另外選配液體轉(zhuǎn)移蓋,便于液體的無菌轉(zhuǎn)移,也可根據(jù)客戶工藝需求定制適配液體轉(zhuǎn)移的瓶蓋。
5、瓶蓋透氣膜疏水化設(shè)計,與液體接觸后不影響透氣膜的密封性和透氣效果。
懸浮細胞常規(guī)推薦接種密度:3-5×105cell/mL,生長到2×106cell/mL左右可繼續(xù)傳代;該密度建議為理論值,實際按照每個細胞特性有波動;培養(yǎng)懸浮細胞需要穩(wěn)定的生長環(huán)境,少操作,少觀察,更有利于細胞生長;
不建議將聚團的細胞頻繁吹散,等待密度高和狀態(tài)改善時,細胞會自行散開;部分細胞聚團生長為特性,吹散不利于生長,請注意查看相關(guān)培養(yǎng)說明;有些細胞本身就是聚團生長(NK92,NK92MI,JURKAT,H209,ATT20等),有些細胞本身就形態(tài)不圓(H9等),為正常現(xiàn)象,無需特殊處理;
豎瓶培養(yǎng)可以促進細胞生長,但由于拿出來觀察時都是橫瓶,觀察久了細胞會貼到底部,觀察完再次豎起來就會有細胞掛在瓶底部,而細胞沒有培養(yǎng)基滋潤很快就會死掉并殘留在壁上,從而導(dǎo)致養(yǎng)著養(yǎng)著細胞越來越少,貼壁細胞越來越多;因此,在培養(yǎng)瓶豎置操作時需注意吹下培養(yǎng)瓶底部的細胞,避免細胞殘留。
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